文献类型： 中文期刊

作者： 宋红梅 ¹ ; 周康奇 ² ; 田雪 ³ ; 汪学杰 ¹ ; 刘超 ¹ ; 刘奕 ¹ ; 牟希东 ¹ ; 胡隐昌 ¹ ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院珠江水产研究所农业农村部休闲渔业重点实验室广东省现代休闲渔业工程技术研究中心

2.淡水鱼类资源与生殖发育教育部重点实验室

3.河南师范大学水产学院河南省水产动物养殖工程技术研究中心

关键词： 橘色双冠丽鱼;色素细胞;分离;培养;鉴定

期刊名称： 渔业科学进展

ISSN：

年卷期： 2021 年 006 期

页码： 53-60

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为探讨橘色双冠丽鱼（Amphilophus citrinellus）黑色素细胞和黄色素细胞的分离、培养与鉴定方法,观察鱼类色素细胞生长特征,本研究以橘色双冠丽鱼的尾鳍、鳞片、皮肤组织为材料,在25℃～28℃条件下,分别在胰蛋白酶溶液和胶原酶溶液中消化6 h和12 h,可有效分离出色素细胞团,细胞悬液经气孔尼龙网过滤后,于35%-45%-55% Percoll试剂中梯度分离和收集黄色素细胞和黑色素细胞。采用K-SFM培养基进行细胞原代培养和细胞纯化,抑制成纤维细胞和角朊细胞的生长,用十四烷酰佛波醇乙酸酯（TPA）、双抗、bFGF的DMEM培养基进行色素细胞传代培养;运用巴染色和透射电镜观察细胞形态,并用分子标记技术进行细胞鉴定。结果显示,细胞分离时,黑色素细胞位于Percoll试剂45%和35%浓度层之间,黄色素细胞位于Percoll试剂35%浓度层上,2种色素细胞均凝聚成絮状。透射电子显微镜观察发现,黑色素细胞内部含大量黑色素小体,而黄色素细胞内部含喋呤体和类胡萝卜素囊泡;黑色素细胞左旋多巴（L-DOPA）染色呈阳性;取第10代色素细胞进行体色相关基因黑皮素1受体（melanocortin receptor 1,MC1R）、酪氨酸酶（tyrosinase,TYR）和牛内皮素受体B（endothelin receptor B,EDNRB） PCR检测,显示基因扩增条带特异性强,表明获得的2种色素细胞具有良好的生物学活性。本研究建立了橘色双冠丽鱼黄色素细胞和黑色素细胞的分离培养与鉴定方法,为进一步开展鱼类体色细胞分化和体色形成的分子机理研究提供了细胞模型。