文献类型： 中文期刊
作者： 张雨良 1 ; 熊国如 1 ; 王健华 1 ; 张树珍 1 ; 官梅花 1 ; 杨文君 1 ; 刘志昕 1 ;
作者机构： 1.中国热带农业科学院热带生物技术研究所农业部热带作物生物技术重点开放实验室
关键词： 甘蔗黄叶病毒;CP外壳蛋白;RNA干扰;ihp表达载体;烟草转化
期刊名称： 植物研究
ISSN： 1673-5102
年卷期： 2011 年 31 卷 05 期
页码： 27-32
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 为提高甘蔗抗病性,本研究根据甘蔗黄叶病毒海南分离物ScYLV-CHN-HN1全基因组序列(GenBank no.HQ342888),利用病毒CP蛋白介导的RNAi技术,针对病毒外壳蛋白CP,设计两对含有酶切位点的特异性引物,CPsf1/CPsr1和CPasf1/CPasr1,以构建好的pMD19-T/CP质粒为模板,pRNAi1017为中间载体,分别合成构建干扰载体的正反向片段pRNAi-CP-F-R,将CP正反向片段分别插入表达载体pCAMBIA2300的相应位置,构建含有发卡结构的RNAi载体p2300-CP-F-R,经过PstⅠ酶切鉴定,证明载体构建成功。通过农杆菌介导的方法,以干扰表达载体p2300-CP-F-R转化烟草,经过PCR检测,得到12株阳性转基因植株,Southern blot杂交和半定量RT-PCR对其检测,证明干扰片段已经整合烟草基因组中并进行了转录,该结果为RNAi介导抗病毒甘蔗育种研究奠定基础。
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