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单因子和正交设计法建立分枝杆菌多重PCR体系

文献类型： 中文期刊

作者： 周方永 1 ; 李岩 2 ; 薄新文 2 ; 马勋 2 ;

作者机构： 1.石河子大学动物科技学院

2.石河子大学动物科技学院;新疆兵团畜牧兽医工作总站;新疆农垦科学院

关键词： 分枝杆菌;多重PCR;假阳性;正交设计

期刊名称： 石河子大学学报(自然科学版)

ISSN： 1007-7383

年卷期： 2013 年 31 卷 04 期

页码： 449-456

摘要： 为了建立一种快速区分鉴定结核与非结核分枝杆菌的多重PCR方法,以分支杆菌属特异基因32kD,结核分枝杆菌种特异基因MTP40和结核分枝杆菌复合群特异基因IS6110为目标基因,设计合成3对特异性引物,以结核分枝杆菌标准株DNA为模板,通过对PCR反应体系中DNA模板浓度、Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度和TaqDNA聚合酶浓度5个因素的正交设计,以及PCR反应条件中各反应参数的优化,建立了鉴别分支杆菌的多重PCR检测方法,并对该方法的特异性、敏感性进行了验证。结果显示:该方法对结核分枝杆菌标准株H37Ra能扩增出506、396和984bp,对卡介苗(BCG)能扩增出506和984bp片段,对禽分支杆菌、胞内分支杆菌、偶发分支杆菌、耻垢分支杆菌、龟分支杆菌能够扩增出506bp片段,对大肠杆菌等的扩增结果均为阴性。建立的多重PCR敏感度最低可检出6.6×10-6 ng。结论:该方法具有特异性高、敏感性好等特点,可用于奶牛结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌的鉴别诊断。

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