文献类型: 中文期刊
作者: 张帅 1 ; 王崇明 1 ; 宋晓玲 1 ; 白昌明 1 ; 黄捷 1 ; 李晨 1 ;
作者机构: 1.中国水产科学研究院黄海水产研究所
关键词: 栉孔扇贝;急性病毒性坏死病毒;杆状病毒凋亡抑制蛋白;原核表达;抗凋亡
期刊名称: 水产学报
ISSN: 1000-0615
年卷期: 2014 年 38 卷 02 期
页码: 117-124
收录情况: 北大核心 ; CSCD
摘要: 在已经完成的栉孔扇贝急性病毒性坏死病毒(acute viral necrosis virus,AVNV)全基因组序列测序与分析的基础上,设计特异性引物,克隆得到了ORF86编码的杆状病毒凋亡抑制蛋白基因(IAP-86)。IAP-86基因与pET32a(+)质粒连接构建得到重组质粒pET32a-IAP86,将重组质粒转化到E.coil BL21(DE3)中,使用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,SDS-PAGE检测显示表达蛋白分子量约为40 ku,经Western-blotting和质谱分析证明,该蛋白即为IAP-86融合蛋白,Co2+柱纯化后得到了纯化的IAP-86融合蛋白。将重组的IAP-86蛋白用FITC标记,荧光显微镜下观察,发现重组的IAP-86蛋白最终能够与栉孔扇贝血淋巴细胞的细胞核和细胞质结合。细胞凋亡检测实验发现,重组的IAP-86蛋白能够在一定程度上抑制栉孔扇贝血淋巴细胞凋亡,凋亡抑制率为7%。本实验应用原核表达成功得到了IAP-86蛋白,并证明IAP-86对栉孔扇贝细胞的凋亡有一定抑制作用,这为进一步研究AVNV的侵染机制提供依据。
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