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香蕉束顶病毒Rep蛋白特性分析及纯化体系的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 余乃通 1 ; 张雨良 1 ; 王健华 1 ; 刘志昕 1 ;

作者机构： 1.中国热带农业科学院热带生物技术研究所

关键词： 香蕉束顶病毒;Rep蛋白;特性分析;纯化体系;建立

期刊名称： 中国农业科技导报

ISSN： 1008-0864

年卷期： 2011 年 13 卷 02 期

页码： 31-37

收录情况： CSCD

摘要： 以香蕉束顶病毒海口分离物DNA1(Accession NO.FJ463042)的Rep蛋白为研究对象,利用生物信息学软件对该蛋白的理化性质、结构组成、信号肽、磷酸化、二级结构、三级结构与功能结构域等作了较为详细的分析与预测,并配置了相关纯化试剂。将含重组质粒pET32b-Rep的E.coli BL21(DE3),接种到LB液体培养基,在20℃、0.1 mmol/L IPTG条件诱导4 h,产生大量的可溶性重组蛋白,经AKTA Explorer100系统亲和层析柱后,用不同梯度的Washing buffer洗脱杂蛋白并对各阶段产物进行12%SDS-PAGE分析,确定了100mmol/L咪唑的Washing buffer洗脱浓度,最终获得大量高纯度的重组蛋白。以His*Tag Monoclonal Antibody为一抗,Western blot鉴定结果表明纯化重组蛋白即为His-Rep融合蛋白。该纯化体系的建立为研究BBTVRep蛋白的结晶奠定了基础,也为今后ABTV、FBNYV、MVDV、PNYDV等病毒的相关复制蛋白纯化提供了重要数据。

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