文献类型： 中文期刊
作者： 钱璟 1 ; 王崇明 2 ; 潘鲁青 1 ; 黄倢 2 ;
作者机构： 1.中国海洋大学水产学院
2.中国水产科学研究院黄海水产研究所
关键词： 引物酶;原核表达;Pico-Green核酸染料;酶学活性;多聚胞嘧啶寡核苷酸
期刊名称： 水产学报
ISSN： 1000-0615
年卷期： 2013 年 37 卷 09 期
页码： 1401-1408
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 根据急性病毒性坏死病毒(acute viral necrosis virus,AVNV)ORF 024序列设计引物,以AVNV的DNA为模板进行扩增AVNV引物酶(primase)基因,同时构建表达质粒pET32a-prim,并转化至E.coli BL21(DE3)进行诱导表达。SDS-PAGE检测显示诱导表达两条蛋白条带,其中分子量为60 ku的蛋白条带与预期表达蛋白条带大小一致,另一蛋白条带分子量约为55 ku,经Western-blotting及质谱分析鉴定分子量60 ku的蛋白条带为AVNV-引物酶,而表达出的55 ku蛋白条带存在部分引物酶多肽片段。RNA结合荧光染料Pico-Green在30 min内荧光强度比较稳定,从而确定30 min为进行AVNV引物酶活性分析的最佳终止反应时间,并在引物合成实验中观察到30 min内引物酶活性较高。当使用多聚胞嘧啶寡核苷酸poly(d C)为模板时,重组引物酶能特异性催化底物GTP。0.1 mmol/L Zn2+可显著增强引物酶活性,而1mmol/L Mn2+和EDTA能抑制引物酶活性。
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