文献类型： 中文期刊

作者： 邹莹 ¹ ; 郭晓萌 ¹ ; 万晓媛 ¹ ; 邱亮 ¹ ; 张庆利 ¹ ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院黄海水产研究所农业农村部海水养殖病害防治重点实验室青岛海洋科学与技术试点国家实验室海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室青岛市海水养殖流行病学与生物安保重点实验室

关键词： 十足目虹彩病毒(DIV1);虾血细胞虹彩病毒(SHIV);环介导等温扩增(LAMP);检测方法

期刊名称： 渔业科学进展

ISSN： 1000-7075

年卷期： 2020 年 006 期

页码： 156-164

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本研究以十足目虹彩病毒(Decapod iridescent virus 1, DIV1)主要衣壳蛋白基因为靶序列设计引物,建立了DIV1的环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification, LAMP)检测方法,并以pMD18-DIV1质粒标准品为模板对该方法的检测灵敏度、检测特异性等进行了评估.结果显示,此方法最适反应温度为64.4℃,优化后的25μl反应体系中包含2.5μl 10*Isothermal amplification buffer、4.0 mmol/L Mg2+、1.2 mmol/L dNTPs、6.4 U Bst 2.0 WarmStart? DNA聚合酶、0.8μmol/L EvaGreen?和4.4μl ddH2O.该方法检测灵敏度下限为3.54*102拷贝/反应;与虾肝肠胞虫(EHP)、致急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌(VpAHPND)、对虾偷死野田村病毒(CMNV)、传染性皮下及造血组织坏死病病毒(IHHNV)、白斑综合征病毒(WSSV)、桃拉综合征病毒(TSV)和黄头病毒(YHV)等主要虾类病原没有交叉反应;具有较好的重复性和稳定性.以GeneFinder?替换EvaGreen?并将其预置于反应管内,结合上述扩增方法可实现对DIV1的现场快速高灵敏检测.本研究建立的DIV1-LAMP实时荧光定量和现场检测方法具有灵敏、特异和快速等特点,为近几年新发虾类病原DIV1的定性、定量以及现场快速检测提供了新的技术选择,有利于对虾养殖业中开展DIV1的监测、预警和防控.