文献类型： 中文期刊

作者： 滑留帅 ¹ ; 王璟 ² ; 白杰 ² ; 朱肖亭 ² ; 陈付英 ² ; 于翔 ² ; 楚秋霞 ² ; 辛晓玲 ² ; 徐照学 ² ; 赵洪昌 ² ; 王二耀 ³ ;

作者机构： 1.河南省农业科学院畜牧兽医研究所河南省畜禽繁育与营养调控重点实验室

2.;河南省农业科学院畜牧兽医研究所河南省畜禽繁育与营养调控重点实验室

3.;河南省农业科学院畜牧兽医研究所河南省畜禽繁育与营养调控重点实验室;

关键词： FABP4基因;慢病毒;小尾寒羊;原代成纤维细胞

期刊名称： 华北农学报

ISSN： 1000-7091

年卷期： 2018 年 01 期

页码： 121-126

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 构建1株能够稳定表达FABP4的小尾寒羊成纤维细胞系,用于小尾寒羊未来的品种保护、开发与利用,首先利用组织块培养法制备了小尾寒羊原代成纤维细胞,然后利用全基因合成法克隆了绵羊FABP4基因,并构建了过表达FABP4的慢病毒载体。经过包装后,使用获得的慢病毒感染小尾寒羊原代成纤维细胞,并通过嘌呤霉素筛选稳定转染细胞,最后应用Western Blot鉴定FABP4蛋白的过表达水平。结果表明,经过传代2~3次后,得到纯度较高的小尾寒羊原代成纤维细胞。滴度测定表明,当在96孔板中添加病毒原液量为10~(-4)μL时,观测不到荧光。当添加量为10~(-3)μL,能够观测到荧光,说明获得慢病毒的滴度为1×10~6TU/m L以上。利用制备的慢病毒感染小尾寒羊原代成纤维细胞,并经过嘌呤霉素筛选后,在荧光显微镜下所有细胞均能观察到绿色荧光。应用Western Blot分析发现,在对照组几乎检测不到FABP4蛋白的表达,而在病毒感染组则能够清晰的观察到FABP4蛋白的表达,说明成功制备了稳定表达FABP4的小尾寒羊成纤维细胞系。