文献类型： 中文期刊

作者： 汪伟 ¹ ; 张雪寒 ¹ ; 王润 ¹ ; 何孔旺 ¹ ; 温立斌 ¹ ; 倪艳秀 ¹ ; 周俊明 ¹ ; 王小敏 ¹ ; 李彬 ¹ ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院兽医研究所,农业部兽用生物制品工程技术重点实验室,国家兽用生物制品工程技术研究中心;安徽医科大学口腔医学院

关键词： 产志贺毒素大肠杆菌;志贺毒素2基因;荧光定量PCR

期刊名称： Agricultural Science & Technology

ISSN： 1009-4229

年卷期： 2014 年 09 期

页码： 1473-1477

摘要： [目的]建立检测产志贺毒素性大肠杆菌(STEC)stx2基因荧光定量PCR方法。[方法]根据GenBank中已发表的STEC stx2基因序列,在保守区域设计PCR引物和探针,构建重组质粒作为阳性模板,优化反应条件,建立荧光定量PCR方法。[结果]利用优化的荧光定量PCR反应体系建立了标准曲线。表明起始模板浓度与Ct值之间线性关系好,相关系数R2均达0.995以上;此方法特异性好,对10种非STEC肠道病菌无特异性扩增;敏感性高,初始模板的检出下限达1.0×102拷贝数/μl;重复性好,批内、指间变异系数均分别小于1%和5%。[结论]该研究成功建立了检测STEC stx2基因的荧光定量PCR方法,为快速检测样品中STEC提供了技术手段。