文献类型： 中文期刊

作者： 魏后军 ¹ ; 范志宇 ¹ ; 胡波 ¹ ; 仇汝龙 ¹ ; 陈萌萌 ¹ ; 宋艳华 ¹ ; 徐为中 ¹ ; 王芳 ¹ ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院兽医研究所/农业农村部兽用生物制品工程重点实验室

关键词： 产气荚膜梭菌;α毒素;自诱导;分泌表达;免疫原性

期刊名称： 江苏农业科学

ISSN： 1002-1302

年卷期： 2022 年 50 卷 014 期

页码： 166-169

收录情况： 北大核心

摘要： 为获得分泌表达的无毒性产气荚膜梭菌α毒素重组蛋白并分析其免疫原性,根据A型产气荚膜梭菌α毒素基因序列,对α毒素的第176位组氨酸突变为天冬酰胺,同时对信号肽序列进行密码子优化,将化学合成的该序列插入到载体pET32a,获得重组质粒pET32a-αH176N,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),通过自诱导的方法分泌表达重组αH176N蛋白.SDS-PAGE及Western blot分析结果显示,αH176N蛋白在乳糖1~2 g/L、28℃诱导条件下高效分泌表达.卵磷脂酶试验及小鼠毒力试验显示,αH176N蛋白失去磷脂酶C活性及毒性.免疫保护试验结果显示,αH176N蛋白与氢氧化铝胶配制成的疫苗,以0.25 mL/只免疫试验兔就能达到100%(6/6)的免疫保护效果,优于传统灭活疫苗免疫2 mL/只的保护效果.