文献类型： 中文期刊

作者： 程慧敏 ¹ ; 刘小晓 ² ; 林健 ¹ ; 刘立新 ¹ ; 赵际成 ¹ ; 段会娟 ¹ ; 王小蕾 ¹ ; 范维 ¹ ; 刘月焕 ¹ ; 钱泓 ² ; 张强 ² ; 杨志远 ¹ ;

作者机构： 1.北京市农林科学院畜牧兽医研究所

2.浙江海隆生物科技有限公司

关键词： Ⅳ型禽腺病毒;Fiber-2蛋白;亚单位疫苗;免疫效力

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2022 年 42 卷 002 期

页码： 218-222

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 表达Ⅰ群Ⅳ型禽腺病毒(FAdV-4)Fiber-2 (knob)蛋白,以制备Fiber-2 (knob)蛋白亚单位疫苗并对其免疫效力进行评价.将FAdV-4 Fiber-2的knob基因克隆至原核表达载体pET28a,构建重组质粒pET28a-Fiber-2 (knob).将重组质粒转化至大肠杆菌BL-21 (DE3),以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达,采用镍离子亲和层析柱纯化,SDS-PAGE检测纯化后的目的 蛋白.将蛋白抗原与佐剂1∶3乳化,分组免疫100,50,25,0 mg/0.5 L FAdV Fiber-2(knob)蛋白亚单位疫苗,攻毒剂量为104.5 ELD50/只,免疫后24 d攻毒,比较不同免疫剂量攻毒保护效果.又制备4批蛋白含量为24 mg/0.5 L FAdV Fiber-2(knob)蛋白亚单位疫苗,比较不同批次间免疫效力差异.结果 显示,成功构建pET28a-Fiber-2 (knob)重组质粒,纯化后的蛋白纯度达到90%,质量浓度为3269 mg/L.当攻毒剂量为104.5 ELD50时,FAdV Fiber-2 (knob)蛋白亚单位疫苗攻毒保护率可达到100%(免疫蛋白抗原量为25~100 μg/只),当攻毒剂量为5×103.9 ELD50时,最小免疫蛋白抗原含量为14.4 μg/只时也可产生100%保护.不同批次间FAdV Fiber-2(knob)蛋白亚单位疫苗均能刺激机体产生抗体,有效保护SPF鸡抵御FAdV强毒攻击,具有良好的免疫保护效力.