您好,欢迎访问北京市农林科学院 机构知识库!

H9亚型禽流感病毒mRNA疫苗的构建与效力评价

文献类型: 中文期刊

作者: 黄程 1 ; 杨志远 1 ; 林健 1 ; 程慧敏 1 ; 王米 2 ; 毛惠琳 2 ; 王国良 3 ; 刘贵明 3 ; 赵际成 1 ; 刘月焕 1 ;

作者机构: 1.北京市农林科学院畜牧兽医研究所

2.苏州近岸蛋白质科技股份有限公司

3.北京市农林科学院生物技术研究所

关键词: H9亚型;禽流感病毒;mRNA疫苗;LNP;免疫保护

期刊名称: 畜牧兽医学报

ISSN: 0366-6964

年卷期: 2025 年 56 卷 004 期

页码: 1843-1853

收录情况: 北大核心 ; CSCD

摘要: H9亚型禽流感(avian influenza, AI)对养鸡业尤其肉鸡产业危害巨大,灭活疫苗不能有效阻止病毒在鸡上呼吸道感染复制,有必要研究H9亚型禽流感病毒(avian influenza virus, AIV)血凝素(hemagglutinin, HA)基因的mRNA疫苗。参考GenBank 2022年公开的HA基因序列,优化HA全长(HA)和HA胞外区(HAe)序列,连接至pUC57载体构建体外转录模板,经体外转录、加帽、纯化,采用脂质纳米颗粒(Lipid nanoparticles, LNP)包封mRNA,并转染人胚肾细胞(293T)、仓鼠肾细胞(BHK-21)和鸡胚成纤维细胞(DF-1),Western blot检测HA表达。20只3周龄SPF鸡,随机分成4组,每组5只,分别经腿部肌肉接种0.3 mL PBS、25μg HA mRNA LNP、25μg HAe mRNA LNP和0.3 mL H9亚型AI灭活疫苗。免疫后4周采集血清,检测血凝抑制(hemagglutination inhibition, HI)抗体,每只鸡滴鼻点眼H9N2亚型AIV 0.2 mL(含106.0 EID50),攻毒后5日采集咽喉拭子和外周血单个核细胞,分别检测病毒分离情况及IFN-γ、IL-4的表达水平,观察气管组织病理学变化。Western blot结果显示两种mRNA HA蛋白均成功表达,经LNP包封后可有效在细胞内完成翻译。HA mRNA LNP和HAe mRNA LNP免疫SPF鸡后HI抗体效价(log2)平均值分别为5.6和3。H9亚型AI灭活疫苗免疫后HI抗体效价(log2)平均值为9.8,极显著高于2个mRNA LNP组(P<0.01)。非免疫对照、HA mRNA LNP、HAe mRNA LNP和H9亚型AI灭活疫苗组病毒分离结果分别为5/5、1/5、4/5和2/5。HA mRNA LNP组IFN-γ表达水平显著高于其他组(P<0.05),HAe mRNA LNP组IL-4表达水平显著低于其他组(P<0.05)。气管组织病理学变化结果表明HA mRNA LNP和H9亚型AI灭活疫苗免疫可有效减轻H9亚型AIV对SPF鸡气管上皮细胞的损伤。构建的H9亚型AIV HA全长mRNA疫苗免疫鸡能提供有效保护,而HA胞外区mRNA疫苗不能提供有效的免疫保护。

  • 相关文献

[1]沙门氏菌鞭毛佐剂禽流感灭活疫苗可诱导良好免疫保护. 黄秀芬,章振华,孙惠铃,孙盈,陈小铃,李永清. 2013

[2]禽流感H9亚型流行毒株交叉免疫攻毒保护试验观察. 姜北宇. 2009

[3]H9亚型禽流感病毒分离鉴定及鸡新城疫、禽流感(H9亚型)、禽腺病毒病三联灭活疫苗对其免疫保护效果研究. 靳换,涂敏,史爱华,赵蕾,沈佳,习硕,张建伟,章振华. 2023

[4]表达传染性法氏囊vp2基因的重组马立克病疫苗对SPF鸡和商品鸡的免疫保护试验. 周雪媚,李永清,佘锐萍,章振华,王宏俊,王德成,熊金茂,彭开松. 2007

[5]禽腺病毒4型鞭毛重组蛋白的原核表达及其免疫效果研究. 刘超,侯磊,韦莉,王菁,全荣,朱珊珊,李子璇,齐宾宾,王利佳,姜海军,王丹,刘爵. 2017

[6]中药复方对H9N2亚型禽流感病毒在MDCK细胞增殖的作用. 程邓芳,梅晨,刘娟,王宏俊,先宏. 2021

[7]抗禽流感病毒M2蛋白单克隆抗体的制备及鉴定. 李永清,杨敬,张莉,韦莉. 2008

[8]一株H9N2亚型禽流感病毒鸡胚培养工艺研究. 史爱华,章振华,张建伟,沈佳,习硕,姜北宇,李林,赵蕾. 2019

[9]一株H9N2亚型禽流感病毒全基因组序列的遗传变异分析. 于博,章振华,姜北宇,钱爱东,李林,景小冬,张建伟. 2010

[10]H9N2亚型禽流感病毒在MDCK细胞中增殖最佳条件研究. 史爱华,张建伟,沈佳,姜北宇,章振华,李林,景小冬. 2011

[11]禽流感病毒HA1基因的克隆及原核表达. 周雪媚,霍惠玲,张飚,李永清,王连群. 2006

[12]2株H9N2亚型禽流感病毒全基因组序列测定及遗传性分析. 沈佳,章振华,姜北宇,李林,景小冬,张建伟. 2011

[13]2株H9N2亚型禽流感病毒全基因组序列测定及遗传性分析(英文). 沈佳,章振华,姜北宇,李林,景小冬,张建伟. 2011

[14]禽流感病毒M2基因在原核系统中表达及其抗原性分析. 李永清,杨敬,韦莉,杨汉春. 2005

[15]表达禽流感HA基因的重组马立克氏病病毒的构建. 周雪媚,霍惠玲,佘锐萍,李永清,冯国民,章振华,王宏俊. 2007

[16]悬浮MDCK细胞源与鸡胚源H9亚型禽流感疫苗免疫效力比较研究. 习硕,赵蕾,史爱华,章振华,李林,沈佳,崔丽娜,姜北宇,张建伟. 2019

[17]MDCK细胞悬浮驯化及对H9亚型禽流感病毒敏感性的研究. 习硕,赵蕾,史爱华,章振华,李林,沈佳,崔丽娜,姜北宇,张建伟. 2019

[18]表达禽流感病毒M2基因的重组马立克氏病病毒的构建. 李永清,杨敬,罗长保,周雪媚,张莉,章振华. 2007

[19]3株H9亚型禽流感病毒在3种传代细胞系上增殖效果研究. 史爱华,姜北宇,沈佳,章振华,李林,景小冬,张建伟. 2013

[20]三种重组禽流感病毒NS1抗原纯化方法的比较. 霍惠玲,李永清,赵燕岭,张莉,王增利,章振华. 2007

作者其他论文 更多>>