文献类型： 中文期刊

作者： 赵光辉 ¹ ; 王秋霞 ¹ ; 鲁琨 ¹ ; 张改平 ² ; 宁长申 ¹ ; 王选年 ² ; 张龙现 ¹ ; 菅复春 ¹ ; 宋海涛 ¹ ;

作者机构： 1.河南农业大学牧医工程学院

2.河南省农业科学院河南免疫学重点实验室

关键词： 猪囊尾蚴;M13h;克隆;原核表达

期刊名称： 中国病原生物学杂志

ISSN： 1673-5234

年卷期： 2008 年 3 卷 10 期

页码： 749-753

收录情况： CSCD

摘要： 目的研究猪囊尾蚴排泄分泌抗原M13h基因的克隆及原核表达。方法利用RT-PCR技术从猪囊尾蚴中扩增排泄分泌抗原M13h蛋白去除信号肽序列的基因,对其进行序列分析,并亚克隆至原核表达载体pET43a上,转化至大肠埃希菌BL21(DE3),用IPTG诱导重组菌株表达融合蛋白,并用Western blot对纯化后的融合蛋白进行鉴定。结果从猪囊尾蚴中克隆到去除信号肽序列的M13h的基因,其序列长度为204 bp,包含198 bp的编码区,与GenBank中西班牙分离株的核苷酸和氨基酸序列的同源性均为100%,与韩国的M13h蛋白的核苷酸与氨基酸序列同源性分别为95.7%和95.3%;经SDS-PAGE电泳鉴定,重组质粒表达产物分子质量单位约74 ku,其中M13h基因表达蛋白的分子质量单位为7.87 ku,与预期结果一致;经Western blot检测,纯化后的复性蛋白质可与兔抗全囊囊尾蚴血清发生特异性反应。结论pET43M13h重组质粒表达产物具有较高的保守性和特异性,可用于猪囊尾蚴病的免疫诊断。