文献类型： 中文期刊
作者： 吕新 1 ; 陈丽华 1 ; 方志鹏 2 ; 李晓琳 3 ; 李玥仁 1 ;
作者机构： 1.福建省精密仪器农业测试重点公共实验室
2.厦门出入境检验检疫局检验检疫技术中心
3.厦门东渡出入境检验检疫局
关键词： PCR产物克隆;零背景;T载体
期刊名称： 福建农业学报
ISSN： 1008-0384
年卷期： 2017 年 32 卷 03 期
页码： 312-316
收录情况： 北大核心
摘要： 为解决平末端加T法构建的T载体,在PCR产物克隆时连接效率低、阳性克隆筛选困难的问题,本研究在利用Taq DNA聚合酶末端转移酶活性对线性化平末端pBluescript SK(+)载体3′-端进行加T反应后,使用T4DNA连接酶处理加T后pBS载体,使3′-端未加T平末端载体重新形成超螺旋状态,而3′-端加T载体则保持线性化状态,在琼脂糖电泳时切胶回收3 000bp处DNA片段,成为pBS-T载体。使用构建的pBS-T载体分别克隆500bp和1 000bp PCR片段,pBS-T载体克隆效率达到100%,实现了对PCR产物的零背景克隆。
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