文献类型： 中文期刊

作者： 杨艳丽 ¹ ; 张齐 ¹ ; 张星星 ² ; 许龙 ³ ; 黄新 ² ; 吴桐忠 ² ; 韩猛立 ² ; 钟发刚 ² ; 张小莺 ¹ ;

作者机构： 1.新疆农业大学动物医学院

2.新疆农垦科学院省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室

3.Centre of Molecular and Environmental Biology

关键词： 牛结核分枝杆菌;Ag85B蛋白;VHH抗体;T7噬菌体展示

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2019 年 39 卷 010 期

页码： 1987-1993

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为获得抗牛结核分枝杆菌的VHH纳米抗体,本研究利用牛结核分枝杆菌Ag85B蛋白免疫双峰驼,免疫效价达到1∶8 000后采外周血分离淋巴细胞,提取RNA反转录成cDNA,利用巢式PCR方法扩增出编码单域抗体VHH的400 bp基因片段.将目的片段用限制性内切酶EcoR Ⅰ和HindⅢ双酶切,与T7噬菌体载体臂T7Select 10-3RI Arms连接,再通过体外重新包装含目的片段的噬菌体.对建立的VHH噬菌体抗体库进行鉴定,原始文库库容为5.7×108 PFU,库阳性率为85.7%.通过4轮生物亲和淘选,筛选并表达出2株高特异性的VHH抗体,均对牛结核分枝杆菌Ag85B蛋白具有特异性.本研究为进一步探讨VHH抗体在牛结核病的诊断和治疗奠定了基础.