文献类型： 中文期刊

作者： 恽佳蕾 ¹ ; 李文良 ¹ ; 毛立 ¹ ; 杨蕾蕾 ¹ ; 孙敏 ¹ ; 张纹纹 ¹ ; 刘茂军 ¹ ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院兽医研究所农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地

关键词： 裂谷热病毒;Gn蛋白;原核表达;多克隆抗体

期刊名称： 中国动物检疫

ISSN： 1005-944X

年卷期： 2021 年 38 卷 002 期

页码： 108-113

摘要： 裂谷热(Rift Valley fever,RVF)是由裂谷热病毒(Rift Valley fever virus,RVFV)引起的一种烈性人兽共患传染病.RVFV囊膜蛋白Gn可诱导产生中和抗体,是RVFV检测方法和疫苗研究的重要抗原靶标.本研究通过分析蛋白抗原位点信息,构建包含Gn蛋白两个主要抗原区域的重组表达载体,随后将质粒转化至BL21感受态细胞,以IPTG诱导重组蛋白表达并优化蛋白表达条件,通过Western Blot鉴定重组蛋白;将重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,并以ELISA、Western Blot、IFA检测多克隆抗体的反应性.结果显示:诱导表达的Gn重组蛋白分子质量约为45 kDa;蛋白表达条件优化为IPTG终浓度0.25 mmol/L,诱导时间5 h;Western Blot鉴定发现蛋白成功表达.通过ELISA测定小鼠三免后血清抗体,结果发现抗体效价大于1:51200;Western Blot检测显示,制备的多抗血清能与重组蛋白发生反应;进一步的IFA检测结果表明,制备的多克隆抗体可与真核质粒转染细胞中表达的Gn蛋白反应.本研究获得的Gn重组蛋白及制备的多克隆抗体为后续RVFV检测方法的建立奠定了基础.