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烟草疫霉菌LAMP检测方法的建立及验证

文献类型： 中文期刊

作者： 吴娜 1 ; 李淑君 1 ; 康业斌 1 ;

作者机构： 1.河南科技大学林学院;河南省农业科学院烟草研究所

关键词： 烟草疫霉菌;烟草黑胫病;环介导等温扩增(LAMP);羟基萘酚蓝(HNB)

期刊名称： 中国烟草科学

ISSN： 1007-5119

年卷期： 2020 年 41 卷 01 期

页码： 74-80

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了建立烟草疫霉菌(Phytophthora parasitica)可视化快速检测方法,试验以羟基萘酚蓝(HNB)为指示剂,以烟草疫霉菌特异的核糖体转录间隔区(Internaltranscribedspacer,ITS)为目的 DNA片段,应用LAMP设计软件设计4条引物,通过优化LAMP反应体系和反应条件,建立一种准确快速的LAMP检测方法,并对该检测方法的特异性、灵敏度及实际应用效果进行验证。结果表明,本试验建立的烟草疫霉菌LAMP反应体系具有较好特异性且灵敏度较高。特异性检测只有烟草疫霉菌株LAMP产物为阳性(蓝色),且电泳结果能够产生梯形条带;灵敏度验证在DNA水平上可达到100 fg,是普通PCR检测方法的1000倍。对田间疑似黑胫病病株及其根际土样提取的DNA进行LAMP检测,各有3份样本为阳性,且病株检测结果与组织分离法对烟草疫霉的检测结果相一致;接种2 d后,病害症状还不明显的烟株中即可检测到烟草疫霉菌。本研究建立的烟草疫霉LAMP检测体系,可快速、简捷地检测到病株及其携带土壤中的烟草疫霉菌。

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[2]玉蜀黍黑粉菌环介导等温扩增检测体系的建立及应用. 段丽萍,曹言勇,李会勇,陈洵,石磊. 2018

[3]烟草黑胫病和根黑腐病生防假单胞杆菌的筛选与鉴定. 千慧敏,文艺,赵辉,倪云霞,刘新涛,邱睿,李小杰,赵新贝,李淑君,刘红彦. 2019

[4]烟草根结线虫削弱烟草对黑胫病抗病性的初步研究. 吴青,林松,孙凤成,周汝鸿. 1988

[5]驻马店烟区主要病虫害发生规律研究. 郭传滨,杨立均,冯国胜,何少华,李辉,王海涛. 2014

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