文献类型： 中文期刊

作者： 张文文 ¹ ; 王小敏 ¹ ; 肖琦 ¹ ; 周忠涛 ¹ ; 汪伟 ¹ ; 温立斌 ¹ ; 李彬 ¹ ; 郭容利 ¹ ; 张雪寒 ¹ ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心

关键词： 猪TTV2;ORF1基因;原核表达;多克隆抗体

期刊名称： 江苏农业学报

ISSN： 1000-4440

年卷期： 2014 年 30 卷 01 期

页码： 119-124

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了构建猪输血传播病毒2型(TTV2)ORF1基因部分片段的原核表达载体,进行原核表达,并利用重组蛋白质制备猪TTV2的多克隆抗体,采用PCR方法扩增出猪TTV2 ORF1基因的部分片段,将其克隆至原核表达载体pcoldI中,构建原核表达质粒pcold-g1,然后转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达。表达产物通过镍离子亲和层析柱进行纯化,用Western blot进行鉴定。将纯化的重组蛋白质免疫新西兰大白兔制备猪TTV2多克隆抗体,Western blot检测抗体特异性,间接ELISA检测抗体效价。PCR扩增获得大小为1 227 bp的片段,重组表达质粒经双酶切及测序证实构建正确;重组蛋白质分子量为5.2×104,主要以包涵体形式存在,纯化后纯度可达95%以上,具有较好的抗原性;制备的多克隆抗体特异性高,抗体效价达1∶12 800。重组蛋白质在大肠杆菌中得到了高效表达,为建立TTV2间接ELISA检测方法提供了优质的包被抗原。