文献类型： 中文期刊

作者： 张雪寒 ¹ ; 何孔旺 ¹ ; 赵攀登 ¹ ; 栾晓婷 ¹ ; 叶青 ¹ ; 温立斌 ¹ ; 倪艳秀 ¹ ; 周俊明 ¹ ; 李彬 ¹ ; 王小敏 ¹ ; 郭容利 ¹ ; 俞正玉 ¹ ; 茅爱华 ¹ ; 吕立新 ¹ ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心

关键词： 肠出血性大肠杆菌O157:H7;hly;stx;toxB;缺失株;小鼠;粘附

期刊名称： 华北农学报

ISSN： 1000-7091

年卷期： 2011 年 26 卷 05 期

页码： 79-85

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli)O157:H7是食源感染的人兽共患病原菌。志贺毒素(Shiga toxin,Stx)、溶血素(haemolysin,Hly)和ToxB是O157:H7重要的毒力因子。选用自杀性质粒pMEG375,体外构建具有同源臂的重组自杀性质粒,借助于sm10宿主菌获得O157:H7杂交菌株,通过同源重组,依次获得O157:H7(△hly△stx△toxB)基因缺失株,△hly△stx△toxB接种HEp-2细胞和感染链霉素处理的Balb/c小鼠,明确缺失株粘附定植的能力。经PCR鉴定,hly、stx和toxB基因分别被壮观霉素(Spc+)、庆大霉素(Gm+)和卡那霉素(Kan+)基因表达盒所代替,Western blot鉴定结果显示,O157:H7(△hly△stx△toxB)检测不到相应的Stx、Hly和ToxB蛋白。O157:H7(△hly△stx△toxB)生长特性与亲本株无明显差异。对于HEp-2细胞的粘附能力明显降低。Balb/c小鼠排菌时间和排菌量明显减少和降低。本研究成功获得O157:H7(△hly△stx△toxB),并且明确Stx、Hly和ToxB的缺失导致了O157:H7对HEp-2细胞和Balb/c小鼠的粘附和定植能力降低。本研究旨在为研制EHEC O157:H7基因缺失疫苗奠定物质基础。