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正交设计优化广藿香基因组SRAP扩增体系的研究

文献类型： 中文期刊

作者： 吴友根 1 ; 郭巧生 1 ; 何际婵 2 ; 林尤奋 3 ;

作者机构： 1.南京农业大学中药材研究所

2.中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所

3.热带园艺植物资源与遗传改良教育部重点实验室/海南大学园艺园林学院

关键词： 广藿香;SRAP标记;正交试验;体系优化

期刊名称： 江苏农业科学

ISSN： 1002-1302

年卷期： 2010 年 04 期

页码： 28-31

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 以改良CTAB法提取的广藿香叶片DNA为模板,采用正交试验设计,从Mg2+、dNTP、引物浓度和DNA聚合酶4因素3水平,对SRAP扩增效果进行研究,比较不同模板DNA浓度对PCR扩增的影响,确立适合广藿香SRAP-PCR反应的最佳体系。利用SRAP-PCR优化体系对引物进行了全面筛选。结果表明:各因素不同水平浓度对PCR反应结果均有显著影响,总体积20μL的SRAP-PCR优化反应体系中含有:2μL 10×buffer、20 ng模板DNA、1.5 mmol/L Mg2+、250μmol/L dNTP、0.3μmol/L Primer、TaqDNA聚合酶1.5 U。运用该体系对部分广藿香单株进行检验,证明该体系稳定可靠;以此体系为基础从90对引物中共筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的SRAP引物18对。

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