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嗜水气单胞菌双重PCR检测方法的建立及应用

文献类型： 中文期刊

作者： 王璐 1 ; 梁利国 1 ; 谢骏 1 ; 徐跑 1 ; 夏飞 1 ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院淡水渔业研究中心

关键词： 嗜水气单胞菌;双重PCR;快速检测;气溶素基因;细胞兴奋性肠毒素基因

期刊名称： 水产科学

ISSN： 1003-1111

年卷期： 2013 年 32 卷 04 期

页码： 219-223

收录情况： 北大核心

摘要： 根据GenBank收录的细胞兴奋性肠毒素(alt)基因和气溶素结构基因(aerA),依据嗜水气单胞菌保守序列分别设计能检测alt和aerA基因的特异性引物,并进行PCR反应体系和反应条件的优化。建立了一种快速检测嗜水气单胞菌双重PCR方法。结果显示,在同一PCR反应体系中,供试菌株嗜水气单胞菌扩增2条目的带,扩增产物的片段大小分别为200bp和280bp,而对照菌株温和气单胞菌、杀鲑气单胞菌、豚鼠气单胞菌、河流弧菌的PCR扩增则无条带检出。敏感性试验结果显示,该双重PCR最低能检测3×104cfu/mL菌体密度的嗜水气单胞菌,对嗜水气单胞菌模板DNA的检出极限为49fg/μL;同时对送检的患病水产品进行抽检,检测出阳性结果的样品均可分离到优势生长的嗜水气单胞菌。结果证实,试验所建立的基于2种基因的双重PCR方法快捷、灵敏,为今后由于该菌所引起的水产动物疾病的检测提供了参考依据。

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