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香蕉束顶病毒海口分离物NSP基因的原核表达

文献类型: 中文期刊

作者: 冯团诚 1 ; 王健华 1 ; 刘志昕 1 ;

作者机构: 1.中国热带农业科学院热带生物技术研究所农业部热带作物生物技术重点开放实验室

关键词: 香蕉束顶病毒;Gateway重组技术;NSP;原核表达

期刊名称: 热带作物学报

ISSN: 1000-2561

年卷期: 2009 年 30 卷 09 期

页码: 1345-1350

收录情况: CSCD

摘要: 应用PCR方法从感染香蕉束顶病毒的香蕉植株幼嫩假茎和叶片总DNA中克隆NSP(Nuclear shuttle protein)基因的编码区,并通过Gateway技术定向重组到原核表达载体pDESTTM-17中的6×His标签下游,经菌落PCR和测序鉴定结果表明,成功构建了原核表达载体pDESTTM-17-NSP。阳性克隆转化E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导表达、SDS-PAGE分析和western blot检测,结果显示,融合蛋白以包涵体的形式稳定表达,分子量约为20ku,与预计值相符。通过诱导条件的优化,确定了最佳的融合蛋白表达条件为25℃、0.1mmol/LIPTG条件下诱导4h。从而为制备NSP多克隆抗体和进一步研究NSP的功能奠定了基础。

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