文献类型： 中文期刊

作者： 喻文娟 ¹ ; 俞菊华 ² ; 李红霞 ² ; 李建林 ² ; 唐永凯 ² ; 于凡 ² ; 何枫 ² ; 傅纯洁 ³ ;

作者机构： 1.南京农业大学无锡渔业学院;中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部淡水鱼类遗传育种和养殖生物学重点开放实验室;东海县水产技术推广站

2.;南京农业大学无锡渔业学院;中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部淡水鱼类遗传育种和养殖生物学重点开放实验室;东海县水产技术推广站

3.;南京农业大学无锡渔业学院;中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部淡水鱼类遗传育种和养殖生物学重点开放实验室;东海县水产技术推广站;

关键词： 鲤鱼;MCAD;LCAD;克隆;原核表达;酶活性

期刊名称： 华北农学报

ISSN： 1000-7091

年卷期： 2017 年 03 期

页码： 48-57

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为探究脂酰辅酶A脱氢酶对脂肪酸β氧化的调控机制,使用RT-PCR在鲤鱼肝脏克隆了脂酰辅酶A脱氢酶家族中的MCAD和LCAD全长c DNA序列,阅读框分别为1 275,1 326 bp,编码424,441个氨基酸,分析表明他们均具备ACADs家族的特征序列:FAD结合位点、底物结合位点、催化位点等,与斑马鱼MCAD和LCAD的一致性分别为93.16%和94.56%。实时定量RT-PCR结果表明,MCAD和LCAD主要在肝脏和心脏表达;不同脂肪源对MCAD的表达没有明显影响,但鱼油对LCAD的表达有明显的刺激作用。此外,构建了原核表达载体MCADs-p EASY(E2)和LCADs-pEASY(E2),经IPTG诱导获得了原核表达蛋白,分子量分别为43.0,43.6 kDa。经检测这2个蛋白在370,450 nm处有明显的吸收峰,表明他们能自然结合FAD辅基。吩嗪硫酸甲酯反应法结果表明:MCAD和LCAD酶活性最适温度均为28℃,酶活分别为9.12,10.29 U/g。结果表明,与哺乳动物类似,鲤鱼MCAD和LCAD在肝脏和心脏表达量高;高不饱和脂肪酸对LCAD的表达有促进作用。