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鳜鱼TCRα基因实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 吴明皇 1 ; 常藕琴 2 ; 石存斌 2 ; 吴淑勤 2 ;

作者机构： 1.大连海洋大学生命科学与技术学院

2.中国水产科学研究院珠江水产研究所

关键词： 鳜鱼;TCRα基因;实时荧光定量PCR

期刊名称： 广东农业科学

ISSN： 1004-874X

年卷期： 2011 年 38 卷 06 期

页码： 7-11

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 根据GeneBank上鳜鱼TCRα基因序列设计并合成特异性引物,以鳜鱼β-actin基因为内参,采用RT-PCR方法从鳜鱼的胸腺总RNA中扩增得到鳜鱼TCRα和β-actin基因,将目的片段纯化后克隆到PMD18-T载体上,测序鉴定。以阳性质粒为标准品,采用SYBR GreenⅡ染料法进行实时荧光定量PCR扩增,构建标准曲线并进行溶解曲线分析。结果表明,鳜鱼TCRα基因的Ct值与标准品稀释度在102～108拷贝/μL范围呈良好的线性关系,r2达0.99以上,溶解曲线分析表明产物为特异的单峰。

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