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小麦TILLING分析中CEL I酶切及PCR反应体系的优化

文献类型： 中文期刊

作者： 潘娜 1 ; 郭会君 1 ; 赵世荣 1 ; 赵林姝 1 ; 古佳玉 1 ; 李军辉 1 ; 王广金 2 ; 徐荣旗 3 ; 刘录祥 1 ;

作者机构： 1.中国农业科学院作物科学研究所/国家农作物航天诱变技术改良中心

2.黑龙江省农业科学院生物技术研究所

3.中国农业科学院生物技术研究所

关键词： 小麦;TILLING;CEL I;优化;糯质基因Waxy

期刊名称： 植物遗传资源学报

ISSN： 1672-1810

年卷期： 2012 年 13 卷 5 期

页码： 830-837

收录情况： CSCD

摘要： 在小麦中建立稳定的基于CEL I酶切的目的基因突变位点检测技术,有助于高通量鉴定目的基因片段的点突变及提高突变检测效率。本研究以冬小麦品种新麦18空间诱变SP_2群体为材料,以小麦糯质基因Waxy为目标片段,通过优化基因组DNA提取方法、调整PCR反应体系中dNTP、Mg~(2+)及引物浓度、改变目标片段CEL I酶切缓冲液成分,以及调整纯化过程中的空气相对湿度等方式,优化了小麦TILLING技术体系。在利用PVP-40法提取DNA过程中,研磨器振动频率提高到30/s,KAc溶液的反应时间延伸为20min时,基因组DNA质量和纯度最佳;在设定的浓度范围内dNTP和Mg~(2+)浓摩对产物影响差异不明显,均能高效扩增出目的条带。引物浓度对产物影响差异显著,最佳引物浓度为0.4μmol/L。20μl酶切体系中,最佳CEL I酶浓度为0.1U且利用超纯水代替CEL I缓冲液。最终在小麦中建立起了基于CEL I酶切的高通量TILLING筛选技术体系。

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