文献类型： 中文期刊
作者： 樊剑鸣 1 ; 朱沙 2 ; 罗俊 2 ; 张改平 2 ;
作者机构： 1.河南省动物免疫学重点实验室
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关键词： 苦瓜;MAP30;毕赤酵母
期刊名称： 现代预防医学
ISSN： 1003-8507
年卷期： 2009 年 010 期
页码：
收录情况： 北大核心
摘要： [目的]克隆苦瓜蛋白MAP30基因,并在毕赤酵母中表达和纯化其融合蛋白,体外测定MAP30诱发胃腺癌细胞MCG803凋亡.[方法]利用RT-PCR技术扩增861bp的苦瓜蛋白MAP30基因编码区序列.克隆至pMD18-T载体.构建苦瓜MAP30毕赤酵母表达质粒pPICZaA-MAP30并导入毕赤酵母Pichia pastoris GS115.SDS-PAGE和Western印迹检测MAP30的表达.采用镍离子亲台层析纯化MAP30并通过单细胞凝胶电泳和MTT实验检测其诱发胃腺癌细胞MCG803的凋亡.[结果]克隆片段与基因库所登录的序列相一致,分泌表达的MAP30-His融合蛋白分子量约为30kDa,MAP30体外能诱发胃腺癌细胞MCG803凋亡,MAP30对MCG803半数抑制浓度(IC50)为72.0μg·ml^-1,在一定浓度下,能使肿瘤细胞形成明显的凋亡细胞核;通过单细胞凝胶电泳,能看到明显的慧星尾,表明MAP30引起了肿瘤细胞基因组的降解.
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