文献类型： 中文期刊

作者： 徐俊锋 ¹ ; 汪小福 ¹ ; 陈笑芸 ¹ ; 彭城 ¹ ; 徐晓丽 ¹ ; 朱青 ¹ ; 缪青梅 ¹ ;

作者机构： 1.浙江省农业科学院省部共建农产品质量与安全国家重点实验室培育基地

关键词： 转基因生物(GMOs);标准质粒;筛选检测;试用性

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1674-7968

年卷期： 2015 年 23 卷 09 期

页码： 1167-1177

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 标准质粒分子能够及时满足转基因生物安全监管需求,被较多地用作转基因标准材料的替代品。本研究通过分析全球商业化种植和国内环境释放的水稻(Oryza sativa L.)、玉米(Zea mays L.)、大豆(Glycine max)和油菜(Brassica napus)4种主要转基因作物的分子特征,选取常用的扩增性较好的蔗糖磷酸合酶基因(sucrose phosphate synthase,SPS)作为内标准基因和外源花椰菜花叶病毒35S启动子(promoter of Cauliflower mosaicvirus 35S,Ca MV35S)、胭脂碱合成酶基因终止子(terminator of nopaline synthase gene,t NOS)、苏云金芽胞杆菌基因(Bacillus thuringiensis,Bt)、双丙氨酰磷抗性基因(biolaphos resistance,Bar)、新霉素磷酸转移酶基因(neomycin phosphotransferase,NPTⅡ)和潮霉素磷酸转移酶基因(hygromycin B phosphotransferase,Hpt)作为水稻转基因筛查靶标序列;选取淀粉合成酶基因(z SSⅡb)作为内标准基因和外源Ca MV35S、t NOS、Bar作为玉米转基因筛查靶标序列;选取凝集素前体蛋白基因(Lectin)作为内标准基因和外源Ca MV35S、t NOS、胰蛋白酶抑制剂基因(cowpea trypsin inhibitor gene,Cp Ti)、烯醇式丙酮基莽草酸磷酸合成酶基因(enolpyruvylshikimate phosphate synthase,EPSPS)作为大豆转基因筛查靶标序列;选取高移动簇蛋白基因(high mobile group protein,HMG)作为内标准基因和外源Ca MV35S、玄参花叶病毒35S启动子(Figwort mosaicvirus 35S,FMV35S)、烟草绒毡层特异启动子(tobacco tapetum specific promoter,PTa29)、胭脂碱合酶启动子(nopaline synthase promoter,P-nos)、t NOS、35S终止子(terminator-35S,T-35S)、TL-DNA基因7(g7)终止子作为油菜转基因筛查检测的目标序列。利用重叠PCR技术将这些筛查目标序列连接在一起,最终克隆到p MD-18T载体上,构建成4套共包含4个内标准基因和13个转基因外源基因的通用阳性质粒分子:p MD-maize、p MD-rape、p MD-rice和p MD-soybean。研究结果表明,所构建的阳性质粒分子对目前国内外4类(大豆、油菜、玉米和水稻)主要转基因作物筛查覆盖率理论上达到90%,而对我国批准进口的转基因作物的理论筛查覆盖率达100%。可满足转基因生物安全监管检测过程中对阳性物质的需求。