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利用Gateway技术改造原核表达载体pGEX-4T-1、pET-28a

文献类型： 中文期刊

作者： 胡丽松 1 ; 邬华松 1 ; 郝朝运 1 ; 谭乐和 1 ; 范睿 1 ; 吴刚 1 ;

作者机构： 1.中国热带农业科学院香料饮料研究所

关键词： Gateway技术;载体改造;胡椒PnHMGB;原核表达

期刊名称： 热带作物学报

ISSN： 1000-2561

年卷期： 2015 年 36 卷 08 期

页码： 1445-1450

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 质粒载体是基因工程研究中不可或缺的工具。为提高载体构建效率,进一步满足基因工程研究在构建表达载体时的需要,本文提供了一种重组型载体的改造策略。基本流程如下:利用带BglⅡ、XhoⅠ酶切位点以及att B重组序列的引物,从Gateway的入门载体p DONR Zeo中克隆到"BglⅡ-att B1-ccd B-att B2-XhoⅠ"片段。通过酶切连接的方法,将该片段插入到原核表达载体p GEX-4T-1以及p ET-28a的多克隆位点,构建具有重组位点以及ccd B致死基因的原核表达载体。以胡椒High mobility group protein(HMGB)基因的开放读码框为目标片段,通过重组反应将目的基因构建到改造后的原核表达载体上,经检测体外诱导表达出大小正确的HMGB蛋白,验证本研究中改造载体的正确性。该载体的成功构建,为基因工程科研工作提供了一个高效的蛋白表达载体以及载体改造的新策略。

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