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磁珠富集法制备大口鲶的微卫星分子标记

文献类型： 中文期刊

作者： 全迎春 1 ; 孙效文 1 ; 刘伟 1 ; 梁利群 1 ; 鲁翠云 1 ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院黑龙江水产研究所

关键词： 大口鲶;微卫星;磁珠富集

期刊名称： 水产学报

ISSN： 1000-0615

年卷期： 2006 年 30 卷 02 期

页码： 43-49

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 通过磁珠富集的方法分离大口鲶(Silurus meriaionalis)的微卫星分子标记。将基因组DNA酶切,梯度离心收集400~900bp片段并纯化,连接Brown接头,用生物素标记的寡核苷酸(CA)15作探针与其杂交,杂交复合物结合到包被有链霉亲和素的磁珠上,然后将这些片段洗脱,PCR扩增,进行克隆构建“基因组文库”,再通过同位素标记的探针(CA)15进行2次杂交筛选,所得到的阳性克隆测序。从所获得593个阳性克隆中选取178个经测序,97.19%(173个)含有微卫星序列,90.60%重复数在10以上,75.98%为完美型。除探针中使用的CA重复单元外,还观察到CT、GA、ATG的重复序列。设计获得120对微卫星引物,合成40对经PCR筛选,结果31对引物扩增出多态性条带。显示出,磁珠富集法是获得微卫星分子标记的一种有效的方法,可成为今后发展该标记的主要方法。同时,制备出的微卫星标记可为今后研究大口鲶的分子遗传育种提供有用的遗传标记。

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