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瓜类黄化褪绿病毒上海分离物外壳蛋白的原核表达及其抗血清的制备

文献类型： 中文期刊

作者： 曾蓉 1 ; 徐丽慧 1 ; 顾海峰 2 ; 陆金萍 1 ; 戴富明 1 ;

作者机构： 1.上海市农业科学院生态环境保护研究所/上海市设施园艺重点实验室

2.上海市嘉定区农业技术服务推广中心

关键词： CCYV;外壳蛋白;原核表达;间接酶联免疫吸附测定

期刊名称： 中国农学通报

ISSN： 1000-6850

年卷期： 2014 年 30 卷 22 期

页码： 276-281

收录情况： CSCD

摘要： 利用RT-PCR技术扩增得到瓜类黄化褪绿病毒(cucurbit chlorotic yellows virus,CCYV)上海市嘉定分离物的外壳蛋白(coat protein,cp)。序列分析结果表明,cp基因的核苷酸序列长度为753 bp,编码250个氨基酸,与已报道的CCYV其他分离物的cp核苷酸相似性均高于95%。将此基因克隆到原核表达载体pET32a(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3)后IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE及Western blotting分析表明,CCYV cp在大肠杆菌中可表达出含有6-His标签的分子量约46 kDa的蛋白。纯化表达蛋白后免疫家兔制备抗血清,间接酶联免疫吸附测定(ID-ELISA)结果显示,制备的抗血清可用于检测田间感病样品中的CCYV。

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