文献类型： 中文期刊
作者： 吴成龙 1 ; 史成银 1 ; 黄倢 1 ; 孔晓瑜 2 ;
作者机构： 1.农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室
2.教育部海水养殖重点实验室
关键词： 大菱鲆红体病虹彩病毒;主要衣壳蛋白;毕赤酵母;表达
期刊名称： 渔业科学进展
ISSN： 1000-7075
年卷期： 2009 年 30 卷 03 期
页码： 57-63
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 依据大菱鲆红体病虹彩病毒(Turbot viral reddish body iridovirus,TRBIV)主要衣壳蛋白(Major capsid protein,MCP)基因序列,设计了一对特异性引物,并在正反向引物中分别引入EcoR I和Not I酶切位点,从而将PCR扩增得到的TRBIV MCP基因双酶切后定向克隆到真核表达载体pGAPZαA的GAP启动子的下游位点,并电转化入大肠杆菌DH5α宿主菌内。经抗生素Zeocin筛选、PCR、EcoR I和Not I双酶切以及测序分析,构建了含有α-factor信号肽的真核重组表达载体pGAPZαA MCP。重组表达质粒pGAPZαA MCP经Avr Ⅱ单酶切后电转导入毕赤酵母X-33中,挑选阳性克隆,提取表达上清经SDS-PAGE和Western-blot免疫印迹分析。结果显示,TRBIV MCP基因在酵母中成功实现分泌表达。阳性重组酵母菌经过72h诱导培养后,重组TRBIV MCP的表达量高达60.2μg/ml左右。
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