文献类型： 中文期刊

作者： 肖松华 ¹ ; 赵君 ² ; 刘剑光 ² ; 吴巧娟 ² ; 王义琴 ³ ; 储成才 ³ ; 俞敬忠 ¹ ; 喻德跃 ¹ ;

作者机构： 1.南京农业大学/作物遗传改良与种质创新国家重点实验室

2.江苏省农业科学院经济作物研究所

3.中国科学院遗传与发育生物学研究所

关键词： 棉花;天麻;抗真菌蛋白;基因;黄萎病;抗性

期刊名称： 作物学报

ISSN： 0496-3490

年卷期： 2016 年 42 卷 02 期

页码： 212-221

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 黄萎病是全球植棉业的主要病害,严重缺乏抗黄萎病资源导致棉花抗黄萎病育种至今未取得显著进展。采用农杆菌介导法,以下胚轴为受体,将天麻抗真菌蛋白基因转化陆地棉品系苏研060,通过愈伤组织诱导、胚性愈伤组织分化和植株再生,获得大量再生苗。分别以NPT II基因、gafp基因、35S启动子-gafp基因特异引物对再生苗进行PCR检测,将95个阳性再生苗嫁接到海7124幼苗砧木上,获得37个成活植株。RT-PCR检测发现,31个植株出现预期的540 bp扩增片段。盆栽花铃期花粉育性鉴定表明,9个转基因植株雄性败育,22个植株花粉育性正常,通过人工自交得到T1代种子。通过转基因作物隔离区种植、特异引物PCR检测、卡那霉素抗性筛选、自交纯合与选择,培育获得22个T3代转基因纯系。Southern blotting检测发现,转基因植株体内有2个gafp基因拷贝。GAFP蛋白免疫印迹表明,16个转基因纯系出现分子量为14 k D的GAFP蛋白,另6个纯系表现出转录后水平上的基因沉默。黄萎病抗性鉴定结果证实,获得3个抗落叶型黄萎病的棉花株系TG09、TG16和TG23。