文献类型： 中文期刊

作者： 范璐 ¹ ; 王丽 ¹ ; 史西保 ¹ ; 樊剑鸣 ² ; 王爱萍 ³ ; 张改平 ¹ ;

作者机构： 1.河南省农业科学院农业部动物免疫学重点开放实验室/河南省动物免疫学重点实验室

2.郑州大学公共卫生学院

3.郑州大学生物工程系

关键词： RNA干扰;牛病毒性腹泻病毒;短发夹RNA;单克隆细胞系;复制

期刊名称： 河南农业科学

ISSN： 1004-3268

年卷期： 2014 年 43 卷 12 期

页码： 134-139

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为研究靶向牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的shRNA对BVDV复制的影响,利用脂质体介导法将BVDV shRNA真核表达质粒pSGH1-sh1083和pSGH1-sh8235及对照质粒pSGH1转染MDBK细胞,通过G418抗性以及有限稀释法筛选获得BVDV shRNA单克隆细胞系subclonepSGH1-1083和subclonepSGH1-8235及对照细胞系subclonepshmock。通过观察其细胞病变效应(CPE)、测定TCID50及RT-PCR、流式细胞术检测BVDV shRNA细胞系对BVDV复制的影响。结果表明,与阴性对照组相比,单克隆细胞系subclonepSGH1-1083和subclonepSGH1-8235的细胞在感染BVDV 72h后CPE不明显,其TCID50低于阴性对照组;RT-PCR结果显示,单克隆细胞系subclonepSGH1-1083和subclonepSGH1-8235的细胞在感染BVDV后病毒E2基因的表达减弱;流式细胞术检测不同细胞系接毒24h后的结合率,单克隆细胞系subclonepSGH1-1083和subclonepSGH1-8235与病毒结合率分别为11.37%和11.51%,与对照组(20.25%)相比有所降低。综上,稳定转染BVDV shRNA的单克隆细胞系subclonepSGH1-1083和subclonepSGH1-8235对BVDV的复制具有抑制作用。