文献类型： 中文期刊

作者： 吴斌 ¹ ; 戴建军 ² ; 张廷宇 ² ; 张树山 ² ; 吴彩凤 ² ; 顾晓龙 ² ; 陈会兰 ² ; 张德福 ² ; 马恒东 ² ;

作者机构： 1.上海市农业科学院畜牧兽医研究所

2.上海市农业科学院畜牧兽医研究所;上海市农业遗传育种重点实验室动物遗传工程研究室;四川农业大学生命科学与理学院

关键词： SMGT;精子;PAMAM-D;猪

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2013 年 03 期

页码： 466-471

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为优化猪精子介导的基因转移(SMGT)技术,提高转基因效率,本试验利用纳米化聚酰胺-胺型树枝状聚合物(PAMAM-D)为载体介导猪精子转染外源DNA,经原位杂交检测其阳性率,体外受精(IVF)分析外源基因的表达。结果显示,0.5μg线状质粒DNA中加入PAMAM-D(质量比20∶1)阳性率最高(P<0.05);孵育时间为90、120min时,阳性率显著高于30、60min组(19.94%、18.57%与8.50%、13.87%;P<0.05);以此条件处理精子,阳性率显著高于无载体和脂质体处理组(23.93%与7.25%、13.25%;P<0.05)。各处理精子经IVF后,PAMAM-D组EGFP表达率显著高于其他2组(9.19%与4.81%、3.43%;P<0.05),各组绿色荧光胚胎经基因组PCR分析均能检测到EGFP基因。结果表明,PAMAM-D可有效介导猪精子转染外源DNA,并通过体外受精将外源基因导入胚胎中。