文献类型： 中文期刊
作者： 吴成龙 1 ; 史成银 2 ; 黄倢 3 ; 孔晓瑜 4 ;
作者机构： 1.中国水产科学研究院黄海水产研究所
2.农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室
3.中国海洋大学水产学院
4.教育部海水养殖重点实验室
关键词： 大菱鲆红体病虹彩病毒;实时定量PCR;SYBR GreenⅠ;定量检测;敏感组织
期刊名称： 农业生物技术学报
ISSN： 1006-1304
年卷期： 2008 年 16 卷 05 期
页码： 28-34
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 大菱鲆红体病虹彩病毒(Turbot reddish body iridovirus,TRBIV)可引起大菱鲆病毒性红体病(viral reddish body syn-drome,VRBS)并导致养殖大菱鲆(Scophthal musmaximus)大量死亡。研究利用TRBIV主要衣壳蛋白基因序列设计的1对引物,结合内嵌式核酸染料SYBR GreenⅠ,建立了TRBIV特异的Real-timePCR检测方法。以10倍梯度稀释的含有TRBIV目的扩增片段的质粒作为标准,进行Real-time PCR反应以确定检测灵敏度,制备标准曲线。结果表明,该对引物具有较高的灵敏度和较强的特异性,能够检测相当于102数量级的TRBIV基因组拷贝,而不与健康大菱鲆组织DNA、淋巴囊肿病毒DNA发生交叉反应。应用建立的Real-time PCR检测方法,对TRBIV的组织敏感性检测和病毒流行情况调查。结果发现,大菱鲆的脾脏、肾脏、脑、鳃、心脏、肝脏、消化道、血液等组织中均可检测到TRBIV的存在,其中脾和肾是TRBIV的最主要的靶器官,每毫克组织的病毒含量分别高达5.23×106和2.18×106个。分子流行病学调查结果显示,山东半岛的多个大菱鲆养殖场中均存在TRBIV的感染和流行,感染鱼每毫克脾组织的病毒含量在1.27×102～2.33×106之间。研究建立了TRBIV Real-time PCR检测方法,灵敏度高,特异性好,可以进行定量分析,TRBIV的快速检测具有应用前景。
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