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鸡大肠杆菌1型菌毛蛋白结构基因(pil A)表达载体构建及表达产物免疫原性

文献类型: 会议论文

第一作者: 戴鼎震

作者: 戴鼎震 1 ; 甘黎明 1 ; 冯秀丽 2 ; 刘洪珍 3 ; 王晓丽 1 ; 夏兴霞 1 ;

作者机构: 1.江苏省农业科学院兽医研究所,南京,210014

2.南京农业大学动物医学院,南京,2100014

3.盐都县兽医站,盐都,224055

关键词: 鸡大肠杆菌病;大肠埃希氏菌;1型菌毛;pilA基因;基因表达产物;灭活疫苗;免疫原性

会议名称: 中国畜牧兽医学会生物制品学分会第十次学术研讨会

主办单位: 中国畜牧兽医学会

页码: 120-124

摘要: 根据发表的鸡大肠杆菌1型菌毛pilA基因序列,在其同源区设计合成了一对引物,经PCR扩增,从鸡大肠杆菌GL7分离株(O78)染色体扩增到大小约551bp的DNA片段,用限制性内切酶SalⅠ和BamHⅠ同时酶切所扩增的外源基因片段和pET-32a(+)载体,再将酶切产物连接,并将连接产物转化到受体菌DH5α中.经SalⅠ和BamHⅠ双酶切、鉴定、筛选到重组质粒F15pilA/pET-32a(+).再将此质粒转化至宿主菌BL21(DE3)中,筛选获得重组菌株BL21(DE3-F15pilA/pET32a(+)).经IPTG诱导,用SDS-PAGE检测表达产物,结果表明重组蛋白的大小与理论数据大小符合.用间接ELISA和Westernblot也再次证实表达产物为菌毛蛋白.用提取的重组菌毛蛋白制成油乳剂疫苗,免疫3周龄健康罗曼小公鸡,每雏皮下注射0.5ml(含表达蛋白200μg).隔离饲养至7周龄,分别用同源菌株GL7(O78)和YR10(O18)经后胸气囊攻毒,同时设未免疫攻毒对照.结果表明,O78和O18免疫攻毒组死亡率为16.7﹪和27.3﹪;O78和O18的未免疫攻毒对照组死亡率分别是83.33﹪和91.67﹪.免疫鸡在气囊、心包及肝脏的病理变化比非免疫鸡显著轻微.结果表明鸡大肠杆菌1型菌毛pilA基因表达产物制成灭活油乳剂疫苗免疫鸡体具有良好的免疫原性.

分类号: S858.31`S852.5

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