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禽流感病毒分离株H5N1非结构蛋白的表达及ELISA检测方法的初步建立

文献类型： 会议论文

第一作者： 霍惠玲

作者： 霍惠玲 1 ; 李永清 2 ; 周雪媚 3 ;

作者机构： 1.河北省兽药监察所(石家庄)

2.北京市农林科学院畜牧兽医研究所(北京海淀)

3.中国农业大学动物医学院(北京)

关键词： 禽流感病毒;非结构蛋白;克隆;表达;ELISA检测;鉴别诊断;血清学

会议名称： 中国畜牧兽医学会禽病学分会第12次学术研讨会

主办单位： 中国畜牧兽医学会

页码： 315-317

摘要： 以H5N1亚型禽流感毒株基因组RNA为模板,利用RT-PCR技术,扩增禽流感病毒分离株(H5N1)的NS1基因,得到的基因片段与T载体连接,重组质粒经BamH Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切后与载体pET32a连接,转化宿主BL21,IPTG诱导表达目的蛋白.SDS-PAGE及western Blot检测和鉴定结果表明,在大肠杆菌中成功表达了NS1蛋白,分子量约45kDa,且该表达产物可与AIV感染的动物血清产生免疫反应.以纯化的融合蛋白作为包被抗原对免疫和人工感染的血清进行ELISA检测.结果显示,该方法检测到AIV感染鸡所产生的抗体,而不能检测到AIV灭活疫苗免疫后的SPF鸡血清中的抗体,由此表明以NS1重组表达产物作为抗原建立的ELISA,可用作AIV疫苗接种与野毒感染的鉴别诊断.

分类号： S854.43`S852.659.5

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