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猪圆环病毒2型重组ORF2蛋白-ELISA诊断方法的建立及初步应用

文献类型： 会议论文

第一作者： 蒋智勇

作者： 蒋智勇 1 ; 宋长绪 1 ; 黄忠 1 ; 刘燕玲 1 ; 张春红 1 ; 王浩文 1 ; 蔡汝健 1 ;

作者机构： 1.广东省农业科学院兽医研究所,广州,广东,510640

关键词： 猪2型圆环病毒;ORF2蛋白;基因表达;ELISA诊断;镍离子金属螯合亲和层析法;血清检测

会议名称： 中国畜牧兽医学会第一届中国养猪生产和疾病控制技术大会

主办单位： 中国畜牧兽医学会

页码： 547-551

摘要： 根据猪圆环病毒2型(PCV2)GD株序列(AY613854),设计一对引物,并以包含PCV2全基因组的重组质粒pMD-ORF2为模板,扩增出含ORF2基因的3'端(576bp),回收PCR产物,将其克隆入pET-32a的BamHⅠ和HindⅢ位点间,构建重组质粒pETORF2,转化大肠杆菌Rosetta-gamuTM(DE3)进行融合表达,表达蛋白质主要以包涵体形式存在.用8mol/L尿素溶解包涵体后,利用镍离子金属螯合亲和层析法纯化蛋白,结果在SDS-PAGE上显示出一条约40ku的目的条带,纯度达到90％以上.以此纯化的表达产物包被酶标板,建立ELISA诊断方法,并对临床236份送检血清进行了检测,结果表明其总阳性率为64.2％(152/236)。

分类号： S852.651`S854.43

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