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猪圆环病毒2型ORF2基因在PcDNA3.1中的表达效果

文献类型： 会议论文

第一作者： 车勇良

作者： 车勇良 1 ; 石运通 1 ; 庄向生 1 ; 陈少莺 1 ; 王隆柏 1 ; 魏宏 1 ; 陈如敬 1 ; 吴学敏 1 ; 周伦江 2 ;

作者机构： 1.福建省农业科学院畜牧兽医研究所 福建 福州 350013

2.福建省农业科学院畜牧兽医研究所 福建

关键词： 猪圆环病毒2型;ORF2基因;DNA疫苗;免疫效果

会议名称： 福建省第五届猪病学术研讨会暨福建省畜牧兽医学会动物疫病学分会第五届第二次学术研讨会

主办单位： 福建省畜牧兽医学会

页码： 60-66

摘要： [目的]构建猪圆环病毒2型(Porcine circovirus 2,PCV2)ORF2 DNA核酸疫苗,并评价其免疫效果和安全性。[方法]设计一对特异性引物,扩增PCV2-ORF2,利用T载体对其进行克隆,与真核表达载体PcDNA3.1在同等条件下进行双酶切,并进行连接,转化感受态细菌DH5 α并克隆,经双酶切鉴定筛选阳性重组质粒,即DNA核酸疫苗,命名为PcDNA3.1-ORF2。将该核酸疫苗瞬时转染Vero细胞,通过ST-PCR鉴定其在细胞内的表达情况;并且将该核酸疫苗按100μg/只腿部肌肉注射免疫Balb/c小鼠,同时设PBS和PcDNA3.1空载体为对照,免疫2次,间隔2周.分别于首免后第14d和第28d采血,用ELISA方法检测其血清抗体.取首免后56d小鼠的心、肝、脾、肺、肾和脑等实质器官,采用PCR方法检测该核酸疫苗的安全性。[结果]成功地构建了PcDNA3。1-ORF2核酸疫苗,在体外Vero细胞中得到了瞬时表达,并且能诱导小鼠产生较强的免疫应答.安全性试验表明该核酸疫苗未整合到小鼠染色体上.[结论]PcDNA3。1-ORF2核酸疫苗可以诱导小鼠产生较强的免疫应答,并且是安全的。

分类号： S858.28

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