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抗病转基因绵羊胚胎生产与移植

文献类型： 会议论文

第一作者： 刘国世

作者： 刘国世 1 ; 徐静 1 ; 张金龙 2 ; 张效生 2 ; 冯建忠 2 ; 连正兴 1 ; 汪锋 1 ; 柴孟龙 1 ; 田秀芝 1 ; 邓守龙 1 ; 韩红兵 1 ; 张运海 3 ; 张璐 1 ; 卓志勇 4 ;

作者机构： 1.中国农业大学,北京 100193

2.天津市畜牧兽医研究所,天津 300112

3.安徽农业大学动物科技学院,安徽合肥 230036

4.中国农业大学,北京

关键词： 绵羊繁殖;胚胎移植;转基因技术;抗口蹄疫病毒;睡美人转座系统

会议名称： 中国畜牧兽医学会2011学术年会

主办单位： 中国畜牧兽医学会

页码： 54-61

摘要： 目的：建立高效的绵羊原核胚生产、人工授精、显微注射、胚胎移植转基因技术体系。同时，利用睡美人(Sleeping Beauty，SB)转座系统的高效性、Toll样受体(Toll like receptor，TLR)对广谱抗病能力的开关调节作用及沉默口蹄疫病毒衣壳蛋白VP1基因表达的特性，构建抗口蹄疫病毒RNAi载体、TLR4表达载体，通过显微注射技术进行抗病转基因绵羊的生产。方法：首先完成抗口蹄疫病毒RNAi靶点筛选、TLR4基因克隆、睡美人转座子结构的改造和转座酶的优化，然后构建抗口蹄疫病毒RNAi载体、TLR4表达载体，筛选高效的绵羊超数排卵方案，最后通过人工授精、显微注射，胚胎移植生产抗病转基因绵羊。结果：本研究采用CIDR+FSH减量+PMSG方案进行超数排卵，平均冲取可用原核胚数为12.95枚;显微注射后移植平均妊娠率为50.98%，产羔率167.9%;注射TLR4基因PCR阳性率为66.70%;注射VP1基因(普通载体)后代阳性率为38.80%;两基因混住时TLR4阳性为33.33%，VP1阳性为58.33%;在北京、天津两地，注射VP1基因(睡美人载体)后代阳性率分别为50.00%、57.14%。结论：本研究显著提高了绵羊原核胚生产、人工授精、显微注射、胚胎移植的效率并批量获得了转TLR4及VP1 RNAi转基因绵羊。

分类号： S826.36

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[1]抗病基因克隆、转基因绵羊胚胎生产与移植. 刘国世,徐静,张金龙,张效生,冯建忠,连正兴,汪锋,邓守龙,张运海,柴孟龙,田秀芝,韩红兵,张璐,卓志勇. 2012

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