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猪戊型肝炎病毒(HEV)分离株SAAS-FX17全长感染性克隆的构建

文献类型： 会议论文

第一作者： 朱于敏

作者： 朱于敏 1 ; 于晓明 1 ; 黄耀伟 2 ; 黄芬芬 3 ; 于瑞嵩 1 ; 董世娟 1 ; 李震 1 ;

作者机构： 1.201106,上海市农业科学院畜牧兽医研究所

2.美国弗吉尼亚理工学院暨州立大学

3.330045 江西农业大学动物医学院

关键词： 猪戊型肝炎病毒;本土分离株;感染性克隆;致病机理

会议名称： 中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次全国会员代表大会暨第三次学术研讨会

主办单位： 中国畜牧兽医学会

页码： 416-422

摘要： 基因4型戊型肝炎病毒(HEV)是流行于我国的主要基因型，本研究旨在建立基因4型猪HEV本土分离株(SAAS-FX17)的感染性克隆，为HEV的复制及致病机理研究提供技术平台。采用套式RT-PCR及RACE方法，将SAAS-FX17株的全长cDNA分10段进行扩增，得到全基因序列。经序列分析，找到均匀分布在全基因序列上的4个单一酶切位点，将全基因序列分成5段进行重新扩增，5'端和3'端加上2个酶切位点，得到5个两端都含有单一酶切位点的片段，分别克隆至pJET1.3载体中。将pGEM-9Zf(-)载体的多克隆位点替换为构建全长cDNA所需的6个酶切位点，经5次双酶切、连接，构建成SAAS-FX17株的全长cDNA克隆。经体外转录，转染Huh-7细胞及肝内注射SD大鼠进行体内外病毒拯救。细胞转染实验经IFA队检测到ORF2蛋白的表达，证实RNA转录物可以在Huh-7细胞内增殖。动物实验结果发现2(2/5)只实验组大鼠在注射RNA后第23天粪便HEV RNA呈阳性，第30天5只大鼠粪便HEV RNA全部为阳性，一直持续至第45天。3(3/5)只大鼠在感染后第30天血清抗体阳转，在第38天抗体水平达到峰值。2(2/5)只大鼠抗体阳转时间较迟，出现在感染后的第40 d，在第45天达到峰值。所有实验组大鼠血清抗体水平在感染后第52d恢复到感染前水平。本研究成功构建了第一株本土基因4型HEV的感染性克隆，证明SD大鼠可作为HEV研究的动物模型。

分类号： S858.28:S852.65

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[1]上海郊区猪戊型肝炎病毒分子流行病学调查. 周佳明,陈冈,司伏生,于瑞嵩,陈冰清,谢春芳,李震,董世娟. 2022

[2]猪戊型肝炎ELISA诊断试剂盒的研制及应用. 刘启文,李震,赵凯,于瑞嵩,唐雪明,朱宏,吴潇,谭芙蓉,王金斌,陶世如,蒋玲曦. 2010

[3]猪戊肝病毒存在准种现象. 张西营,朱瑞良,朱于敏,董世娟,于瑞嵩,沈世缘. 2011

[4]适应肠道细胞的猪德尔塔冠状病毒对仔猪的致病性分析. 石迎,陶洁,李本强,程靖华,刘惠莉. 2024

[5]葡萄抗灰霉病机理研究进展. 殷向静,奚晓军,查倩,和雅妮,蒋爱丽. 2023

[6]猪德尔塔冠状病毒致病机理研究进展. 石迎,陶洁,李本强,程靖华,刘惠莉. 2024

[7]猪流感病毒分离株特性及致病性研究. 哈卓,张鹏超,师小潇,李倩,刘永杰,刘惠莉. 2011

[8]由麻疹病毒思考小反刍兽疫的问题. 李震,董世娟,曾江勇,朱于敏,色珠. 2008

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