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草鱼呼肠孤病毒HZ08株VP4蛋白多克隆抗体的制备及其特性分析

文献类型： 会议论文

第一作者： 曾伟伟

作者： 曾伟伟 1 ; 王庆 1 ; 刘宝芹 1 ; 刘永奎 1 ; 石存斌 1 ; 吴淑勤 1 ;

作者机构： 1.农业部渔药创制重点实验室，中国水产科学研究院珠江水产研究所，广州，510380

关键词： 草鱼;呼肠孤病毒;蛋白基因;多克隆抗体

会议名称： 2012第四届中国兽药大会

主办单位： 中国畜牧兽医学会;中国微生物学会;中国兽药协会

页码： 700-705

摘要： 目的：表达草鱼呼肠孤病毒(GCRV)HZ08株VP4蛋白及制备VP4蛋白高效价多克隆抗体并对其特性进行初步分析。方法：采用PCR方法扩增草鱼呼肠孤病毒HZ08株s6基因(表达VP4蛋白)部分节段，经BamHI和Xho I双酶切后插入pET-32a(+)原核表达载体，构建的pET32a—s6重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株，经IPTG诱导表达，SDS—PAGE鉴定目的蛋白的表达并提取包涵体，纯化目的蛋白。然后用纯化蛋白免疫新西兰大耳白兔制备多克隆抗体，以间接ELIsA方法测定其效价，并以Western blot鉴定抗体特异性和识别天然蛋白的免疫学特性，结果：SOS—PAGE电泳分析显示，表达的目的蛋白约为51kDa，与预期结果相符，制备的多克隆抗体效价达1：8000以上，且具有较高的特异性，制备的多克隆抗体血清对天然蛋白-病毒结构蛋白具有良好的识别能力。结论：制备了具有高亲和性、特异性和良好识别天然蛋白能力的抗VP4蛋白多克隆抗体，为GCRV的检测、VP4的生物学功能和抗原表位深入研究奠定了基础。

分类号： S943.112:S941.41

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[1]草鱼呼肠孤病毒HZ08株VP4蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备. 曾伟伟,王庆,张乐生,刘宝芹,刘永奎,石存斌,曾令兵,吴淑勤. 2011

[2]草鱼jam-a基因的克隆及表达分析. 田园园,焦真真,董浚键,孙成飞,马冬梅,叶星. 2017

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