文献类型： 会议论文
第一作者：
作者： 毕延震 1 ;
作者机构： 1.湖北省农业科学院畜牧兽医研究所生物工程研究室
关键词： 猪;遗传标记;转基因技术
会议名称： 第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会
主办单位： 中国农业生物技术学会
页码： 57-57
摘要： Introduction:Marker-free transgenic technology is highly desired to create genetically modified pigs,in term of food safetyand consumer ethics.AΦC31 integrase has been used to introduce site-specific transgene integration into pseudo attPsites of animal genomes.It represents a powerful tool to produce transgenic animals.Here we attempted to examineits efficacy to mediate transgene integration into pig genome.We also wished to establish a marker-free transgenictechnology in large farm animal.Materials and methods:Donor and acceptor pigs were Hubei White Pig raised in the farm of Institute of Animal Science and VeterinaryMedicine,Hubei Academy of Agricultural Science.PBCPB+and PCMV-1NT were gifts of Prof.Calos(StanfordUniversity).PEGFP-N1-attB reporter plasmid was constructed in our group.ΦC31 mRNA were purchased fromStanfordbio Inc.(Jiangsu).Results and discussion:ΦC31 mRNA and attB-containing pEGFP-N1 plasmid(PEGFP-N1-attB)were microinjected into 120 pig 1-cellzygotes and transferred into 5 surrogate pigs.32 piglets were live born from 4 acceptor pigs.PCR analysis showed that 7 of them were attB and EGFP positive individuals.The transgenic positiverate is 7/32=22%;gene transfer efficiency is 7/120=5.83%.In comparison to naked DNA pronuclearmicroinjection,this efficiency is significantly high.One hot spot pseudo attP site (pig pseudo attP-1,ppp-1)was identified from2 piglets by TAIL-PCR.PPP-1 is located in an intergenic region of pig chromosome 1,implyingthat transgene integration into this site does not destroy any endogenous genes.Up to now no abnormal phenotypeswere observed in term of birth weight,animal behaviors.This also demonstrated that PPP-1 appears to be safeharbor for transgene integration.
分类号： S828.1
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