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传染性法氏囊病病毒VP2单克隆抗体夹心ELISA检测试剂盒的研制

文献类型： 会议论文

第一作者： 刘静静

作者： 刘静静 1 ; 王永山 2 ; 欧阳伟 2 ; 夏兴霞 2 ; 潘群兴 3 ;

作者机构： 1.山东农业大学动物科技学院,山东泰安,271018

2.江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心,南京,210014

3.江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术

关键词： 鸡;传染性法氏囊病病毒;单克隆抗体;免疫荧光检测

会议名称： 中国畜牧兽医学会家畜传染病分会第八次全国会员代表大会暨第15次学术研讨会

主办单位： 中国畜牧兽医学会

页码： 847-852

摘要： 为研制传染性法氏囊病病毒(IBDV)快速检测试剂盒,用重组IBDV-VP2蛋白免疫BALB/c小鼠,制备免疫脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞触合,获得三株稳定分泌抗VP2蛋白单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株,分别命名为1D11、2G8和2E5,抗体亚类分别为IgG1κ、IgG2bκ和IgG1κ。间接免疫荧光试验(IFA)证明,三株单抗均与VP2发生特异性反应。相加ELISA证明三株mAb识别VP2不同的抗原表位。在病毒中和试验中,1D11和2G8腹水对IBDV的中和效价分别为104和103,而2E5无中和活性。用亲和层析方法纯化1D11和2E5,分别作为包被抗体和标记抗体,建立了IBDV夹心ELISA检测方法,优化了实验条件,测定了其主要性能指标,对IBDV的最低检出量为102TCID50/mL.用夹心ELISA、AGP和RT-PCR三种方法同步检测8种实验样品,夹心ELISA与RT-PCR的检测结果一致,显著高于AGP方法。组装成的试剂盒,置于37℃保存7d、4℃保存6个月和-20℃保存24个月,其检测结果没有显著差异(P＞0.05).

分类号： S858.31:S852.65`S852.4

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