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两种方法快速检测微小原甲藻的比较研究

文献类型: 会议论文

第一作者: 张凤英

作者: 张凤英 1 ; 石彦红 1 ; 马凌波 1 ; 徐兆礼 1 ;

作者机构: 1.中国水产科学研究院东海水产研究所,农业部海洋与河口渔业资源及生态重点开放实验室,上海200090

关键词: 微小原甲藻;环介导恒温扩增反应;荧光定量;分子鉴定

会议名称: 中国海洋学会2013年学术年会

主办单位: 中国海洋学会

页码: 1002-1002

摘要: 本文利用环介导恒温扩增(LAMP)和实时荧光定量PCR技术成功鉴定了赤潮微藻微小原甲藻(Prorocentrum minmum),并对这两种方法进行了特异性和敏感性验证.LAMP方法特异性检验显示,只有微小原甲藻为阳性扩增,其他对照藻类均为阴性;敏感性检验表明,LAMP方法的敏感度是常规PCR的10倍,最低检测限仅为36 pg DNA.实时荧光定量PCR最低检测限度为0.1个细胞,能够检测到10 pg DNA.利用荧光定量PCR方法建立的标准曲线对微小原甲藻进行计数,与显微镜计数结果非常一致。为进一步验证这两种方法在室外检验的可行性,进行了初步模拟现场样品检测,以含目标藻超声波破碎藻液与其他藻液的混合物为阳性对照模板,不含目标藻的藻液混合物为阴性对照模板,结果可以看出,其他藻的存在对目标藻的LAMP扩增和实时荧光定量PCR扩增没有任何影响。总之,LAMP方法特异性和灵敏度高,检测速度快,整个过程在1个小时内完成,操作简单,设备要求低,特别适合于现场检测;实时荧光定量PCR方法精确度和灵敏度高,稳定性和重复性好,适合于实验室内检测。

分类号: Q949.24

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