文献类型： 会议论文
第一作者： 王寅彪
作者： 王寅彪 1 ; 乔松林 1 ; 万博 1 ; 鲍登克 1 ; 李任峰 1 ; 郭军庆 1 ; 张改平 2 ;
作者机构： 1.河南省农业科学院动物免疫学重点实验室 郑州 450002
2.河南农业大学牧医工程学院 郑州450002
关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒;跨膜糖蛋白;串联基因;高效表达;免疫原性
会议名称： 2013年全国动物疫病与食品安全博士后学术论坛
主办单位： 河南省农科院免疫学实验室
页码： 29-33
摘要： 为建立基于GP5蛋白的PRRSV中和抗体检测方法,本实验通过基因合成技术将GP5蛋白的胞外区(GP5-ecto)进行串联合成,并将该串联基因克隆到pET28a载体上,在37℃培养含重组质粒pET28a-GP5-ecto的 E.coli BL21(DE3)细胞至OD600值为0.6-1.0时,以终浓度为0.5mM的IPTG诱导4小时后,重组GP5-ecto蛋白实现了高效表达.Western blot表明GP5-ecto蛋白能与PRRSV阳性猪血清发生特异性反应.Ni-NTA亲和层析纯化后,间接ELISA证实1∶400倍稀释的PRRSV阳性猪血清可检测到低达0.125μg/ml的GP5-ecto蛋白,表明GP5-ecto蛋白具有良好免疫原性.IFA试验证实GP5-ecto蛋白免疫BALB/c小鼠后获得的阳性鼠血清能与天然PRRSV病毒发生特异性反应,进一步说明GP5-ecto蛋白具有良好免疫原性.本研究获得的GP5-ecto蛋白为建立检测PRRSV中和抗体的ELISA方法提供了材料.
分类号： S858.28:S852.651
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