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A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1的表达纯化及活性检测

文献类型： 会议论文

第一作者： 刘畅

作者： 刘畅 1 ; 卢清侠 2 ; 杨继飞 1 ; 王世红 1 ; 王寅彪 1 ; 郭官鹏 3 ;

作者机构： 1.河南省农业科学院农业部动物免疫学重点开放实验室 河南省动物免疫学重点实验室,郑州450002

2.河南农业大学牧医工程学院,郑州450002

3.河南省农业科学院农业部动物免疫学重点开放实验室 河南省动物免疫学重点实验室,郑州

关键词： 动物A型口蹄疫病毒;结构蛋白;基因表达;抗体检测

会议名称： 2013年全国动物疫病与食品安全博士后学术论坛

主办单位： 河南省农科院免疫学实验室

页码： 36-40

摘要： 为获得具有活性的A型FMDV VP1蛋白,以A型vp1重组质粒pMD19T-A-vp1为模板,利用PCR扩增得到A型FMDV vp1基因片段,将此基因片段与原核表达载体pET28a连接,构建重组质粒pET-A-vp1.经IPTG诱导表达含重组质粒pET-A-vp1的E.coli BL21 (DE3)菌后,SDS-PAGE显示VP1蛋白以包涵体形式获得高效表达,蛋白分子质量约为29 ku.通过对IPTG浓度及诱导时间进行优化,发现在37℃条件下,IPTG终浓度为0.3 mmol/L,诱导表达6h后,VP1蛋白的表达量最大.Western-Blot分析表明,VP1重组蛋白能够被A型口蹄疫阳性血清特异性识别.ELISA检测结果显示VP1包涵体蛋白经洗涤纯化,尿素浓度梯度透析复性后具有较高的活性.A型FMDV VP1活性蛋白的成功表达为进一步研制口蹄疫基因工程疫苗和诊断试剂盒奠定了基础.

分类号： S852.65

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