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gga-miR-21过表达细胞株对传染性法氏囊病病毒复制的影响

文献类型： 会议论文

第一作者： 朱向东

作者： 朱向东 1 ; 王永山 2 ; 王永强 1 ; 潘群兴 3 ; 毕振威 4 ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京 210014

2.南京农业大学动物医学院,江苏南京210095

3.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150001

4.江苏

关键词： 鸡传染病;法氏囊病病毒;小分子核糖核酸;表达系统;病毒复制

会议名称： 中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

主办单位： 中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会;中国免疫学会兽医免疫分会;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所

页码： 8-13

摘要： 为了探讨gga-miR-21对传染性法氏囊病病毒(IBDV)复制的影响,用PCR方法从鸡的肝细胞基因组中扩增细胞pri-gga-miR-21,定向克隆于慢病毒表达质粒pL-EGFP中,获得重组慢病毒表达质粒pL-miR-21.将pL-miR-21和3个包装质粒pLP1、pLP2和pLP/VSVG混合物共转染293FT细胞,获得含gga-miR-21基因的重组慢病毒VL+miR-21.用VL+miR-21感染DF-1细胞,经杀稻瘟菌素筛选获得了过表达gga-m iR-21的细胞株DF-miR-21,用qRT-PCR检测gga-miR-21的表达量比正常DF-1细胞提高了60％.将IBDV接种到DF-miR-21细胞,在96 h后,病毒滴度为10475 TCID50/0.1 mL,而正常DF-1细胞的病毒滴度为108.75 TCID50/0.1mL.用生物信息学方法和双荧光素酶报告系统分析验证,在IBDV基因组B片段上具有gga-miR-21的结合靶点.将IBDV感染的DF-miR-21细胞,用western-blot分析,VP1蛋白的表达量较正常DF-1细胞显著降低;用qRT-PCR分析,VP1 mRNA水平与正常DF-1细胞没有明显差异.本实验结果表明:细胞gga-miR-21可抑制IBDV的复制,其分子作用机理是在VP1基因翻译水平上(VP1蛋白的合成)而不是在转录水平上(VP1mRNA的转录)实现的.

分类号： S858.31:S852.659.4

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