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感染高粱花叶病毒甘蔗叶片cDNA文库构建及评价

文献类型： 会议论文

第一作者： 张树珍

作者： 张树珍 1 ; 王健华 1 ; 熊国如 1 ; 王俊刚 2 ;

作者机构： 1.中国热带农业科学院热带生物技术研究所,农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室,海口 571101

2.中国热带农业科学院热带生物技术研究所,农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室,

关键词： 甘蔗;高粱花叶病毒;互作分子机制;单链脱氧核糖核酸;文库构建

会议名称： 中国作物学会甘蔗专业委员会第15次学术研讨会

主办单位： 中国作物学会甘蔗专业委员会

页码： 186-191

摘要： 为了研究甘蔗花叶病与甘蔗寄主致病的互作分子机制,本文利用SMART技术成功构建感染高粱花叶病毒甘蔗叶片的cDNA文库,用于后续酵母双杂交互作蛋白筛选试验.本文采用Omega公司Plant RNA Kit提取感染高粱花叶病毒甘蔗叶片总RNA,经过Oligotex纯化获得mRNA,将其反转录成cDNA第一链,再在DNA聚合酶作用下,通过长距离PCR扩增双链cDNA.经SfiI酶切并去除短片段后,连接到pGADT7-SfiI载体上成功获得初级cDNA文库,最后以初级文库100万克隆为基数扩增,得到扩增文库并提取质粒.经检测构建的文库容量为1.6×106CFU,文库滴度2.2×106CFU/mL,文库cDNA插入片段长度主要分布在700-2000bp之间,文库重组率约为96％.以上结果表明该文库质量较好,为筛选分离抗病功能基因及开展寄主与病毒互作的研究奠定了基础.

分类号： S435.661

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