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高粱花叶病毒外壳蛋白的原核表达及其抗血清制备

文献类型： 会议论文

第一作者： 王洪星

作者： 王洪星 1 ; 龚殿 1 ; 孙玉娟 1 ; 张雨良 1 ; 王健华 2 ;

作者机构： 1.中国热带农业科学院热带生物技术研究所农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室,海口 571101

2.中国热带农业科学院热带生物技术研究所农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室,海口 57

关键词： 甘蔗;高粱花叶病毒;外壳蛋白;原核表达;抗血清制备

会议名称： 中国作物学会甘蔗专业委员会第15次学术研讨会

主办单位： 中国作物学会甘蔗专业委员会

页码： 204-210

摘要： 高粱花叶病毒(Sorghum mosaic virus,SrMV)是世界上分布最广的侵染甘蔗的病毒之一,引起甘蔗花叶病,对甘蔗产业危害很大.本研究根据SrMV外壳蛋白(coatprotein,CP)基因序列合成一对引物,以海南(SrMV-HN)染病植株总RNA为材料,采用RT-PCR方法克隆了长约987bp的目的片段.将CP基因与质粒pET32a(+)连接,构建了含SrMV CP基因的融合蛋白原核表达载体pET32a-SrMVCP.然后用正确的重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3),经IPTG诱导后,SDS-PAGE检测出一条约36kD的特异融合蛋白表达谱带.融合蛋白主要以可溶性蛋白形式稳定表达.通过优化诱导条件,确立了CP基因表达的最佳条件:IPTG终浓度为0.1mmol/L,诱导时间为4h,诱导温度为30℃.用Ni2+-NTA琼脂糖亲和层析纯化融合蛋白,免疫家兔制备出抗血清.通过酶联法(ID-ELISA)测定本实验制备的SrMV CP抗血清工作浓度为1:1000,Western blotting检测结果表明,抗血清与SrMV-HN诱导表达的CP蛋白发生特异性反应.对田间25个甘蔗样品进行检测,结果表明该抗血清的效价高、灵敏度高、特异性强,可以应用于田间样品的检测.

分类号： S435.661

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